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荧光定量PCR仪操作与维护简述
点击次数：1098 更新时间：2020-01-15
     简单的说，荧光定量PCR仪就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。
 
    目前，常用的技术，可以将一段基因复制为原来的一百亿一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准，可以将PCR仪分为普通PCR仪，梯度PCR仪，原位PCR仪，实时荧光定量PCR仪四类。
 
    荧光定量PCR仪实验操作注意事项：
 
    尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：
 
    1、戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套；
 
    2、使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染；
 
    3、避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面；
 
    4、操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的度；
 
    5、加入反应模板，加入后盖紧反应管；
 
    6、荧光定量PCR仪操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性；
 
    7、尽可能用可替换或可高压处理的加样器，由于加样器容易受产物气溶胶或标本DNA的污染，使用可替换或高压处理的加样器。
 
    如没有这种特殊的加样器，少PCR操作过程中加样器应该，不能交叉使用，尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区；
 
    8、荧光定量PCR仪重复实验，验证结果，慎下结论。

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