NanoDrop 2000分光光度计原理使用说明

 

　　（1）预热是保证仪器精度和稳定性的重要步骤。

 

　　（2）试管的洁净度直接影响实验结果。因此，洗碗是特别重要的。用自来水反复冲洗用过的小杯，再用蒸馏水冲洗，倒立在滤纸上，晾干后放回小杯盒中。如有必要，对对比色盘进行更细致的处理，如用浓硝酸或铬酸洗液浸泡，冲洗干净。

 

　　（3）试管与分光光度计应同时使用，否则会造成较大的实验误差。不能用刀代替1.37200光栅分光光度计。

 

　　（4）彩皿中的液体应达到其容量的2/3，太少会影响实验结果，太多会在测量过程中容易溢出并污染仪器。试管内的样品装载量应在2/3和3/4之间。

 

　　（5）在操作小杯时，应抓住“粗糙表面”，防止与“光滑表面”接触而通过光路。如果小杯表面有液体，用丝绸布擦干，以确保不会影响平滑的路径。

 

　　（6）待测溶液浓度过高时，应选用光径较短的试管。吸光度读数一般应在0.1 ~ 0.8之间。由于毛坯的测量、标准和溶液的测试使用的是相同光径的试管，所以不需要考虑光径变化所带来的影响。

 

　　在NanoDrop 2000分光光度计的测定过程中，发现同一溶液在不同时间的测定结果不同，即重复性不佳。造成这种差异的原因是什么？除判断错误的因素外，可能的原因如下：

 

　　1、可见光分光光度计预热时间不够或预热方法不正确，应延长预热时间或使用正确的预热方法。

 

　　2、由于长期使用，光电变换器的光电转换效率发生了变化。此时标准溶液和待测溶液的吸光度均降低，在相对定量的情况下对结果影响不大。但是，对于这类仪器，一般建议连续使用时间不超过3h，如果需要较长时间，间歇使用30min。

 

　　NanoDrop 2000分光光度计的其他问题

 

　　1、发现在测量过程中一些不良操作不利于仪器的维护，用户应尽量避免。如对上述仪器进行操作（如浇注溶液）；吸收器置于仪器的表面板上。在实验室中与不同仪器的吸收罐混合使用。

 

　　2、防尘防潮，分光光度计NanoDrop 2000一般采用塑料布盖，不使用时将整个仪器盖住，是一种很好的防尘方法。然而，我发现很多实验室并不需要附加一个塑料布盖，但是我使用的是普通的布盖或由布盖制成的仪器，除尘效果不如塑料布盖理想。此外，在塑料布盖上只放几袋防潮硅胶，也能更好地发挥延长防潮效果。在防潮时，如果可见分光光度计带有防潮干燥筒，应经常检查，发现变色后立即更换新的或待干燥后再使用。

 

　　NanoDrop 2000分光光度计种类繁多，但有三种类型：简单型、中等类型和类型。选择分光光度计时需要考虑以下几个方面：

 

　　1、波长检测范围和波长选择方法：仪器波长检测范围越宽，价格越高，当然用户需要根据自己的需要选择合适的波长范围；对于简单的仪器，波长的选择方法一般是手工搜索，这种重复性较差，仪器中的波长可以根据自动搜索或扫描的方式设置，第二种类型的波长扫描速度齿轮也会增加。

 

　　2、梁式：梁式可分为单梁式、双梁式或准双梁式。单光束一般适用于测量给定波长的吸光度，不能用于全光谱扫描。双光束可自动记录，快速全波段扫描。它可以消除光源不稳定、探测器灵敏度变化等因素的影响，特别适用于结构分析；伪双光束的优点是可以监测光源变化引起的误差。其原理是将同一单色仪发出的光分为两束，一束直接到达检测器，另一束通过样品后到达检测器。但是，这种方法并没有消除引用的影响。

 

　　3、光源：钨丝灯和卤钨灯（320 ~ 2500nm）主要用于可见光区；紫外区主要采用氢灯和氘灯（180-375nm）。氙气灯可作为紫外和可见光的光源。

 

　　4、样本支持：简单样本支持为推拉四连杆池框架，一次只能测量一个样本，基准和样本两次测量；样品池支架的类型为两种固定类型，分别为样品通道和参考通道，可以同时测量参考和样品的吸光值。

 

　　5、狭缝：简单的狭缝类型一般为定宽模式，狭缝宽度大多为2nm，或1.5nm;该仪器的狭缝是连续可调的，可适应高分辨率的需要。

 

　　6、光学性能指标：光学性能的好坏直接影响测量的精度，其中光栅的技术指标尤为重要。光栅质量较好，一般光栅为凹面光栅，与大尺寸凹面光栅对应的凹面光栅槽数较多，因此分辨率和杂散光指数优于简单仪器。

 

　　7、检测器：检测器是将光信号通过溶液转换成电信号，利用光电效应放大电信号的装置。简单仪器一般采用光电二极管；中间型仪器采用硅光电二极管；I型仪器使用高灵敏度光电倍增管和红外探测器。

 

　　8、显示：简易仪器大多为机械表头或数码管显示，无数据处理器；仪器显示为液晶显示或与计算机连接，数据处理可由仪器本身或外部计算机进行。

 

　　9、测量方式：NanoDrop 2000分光光度计主要是定点（固定波长）吸光度或透射率测量，波长扫描测量基本不可能；可显示透射率、吸光度、浓度直读、单光束、单点扫描。

 

　　10、测量附件：测量仪器质量的一个重要方面是看仪器是否有丰富的辅助测量设备，如偏振附件、积分球附件、反射附件、自动采样器附件、色度分析软件、薄膜附件等。

 

　　11、被测样品状态：NanoDrop 2000分光光度计一般测量液体样品，红外分光光度计一般可以分析各种状态的样品（气体、液体和固体）。