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ABI7500荧光定量PCR仪的使用注意事项
点击次数：2474 更新时间：2020-10-15
 　　一、ABI7500荧光定量PCR仪的使用注意事项：
　　1、ABI7500荧光定量PCR仪目的条带很亮，但是边沿不清楚，前后有拖尾现象。出现这样的问题，则需要进行细致的分析，因为引起该问题的可能很多。
　　2、可先检查是否模板质量问题，如有降解等，模板应避免反复冻融。也有可能是抽提RNA时有污染，则需要重新抽提RNA。
　　3、此外，也可能是非特异性扩增引发该问题，可提高退火温度，少循环次数。电泳缓冲液时间太长，ph值和盐离子浓度明显改变、电泳时电压太高、电泳液过久没换，电泳胶脏了等都可能引发该问题。
　　4、如果不是由上述原因引起，则进一步检查加样量是否过大，制胶过程中胶孔是否制好，EB是否冲洗干净、模板中是否混有基因组DNA或蛋白等。也需考虑是否扩增的条件不合适。针对具体原因再采取相应的措施。
　　5、PCR产物何时需要用凝胶纯化，何时不需要？当凝胶分析扩增产物只有一条带时，则不需要使用凝胶纯化。当可见其他杂带时，则可能是积累了大量引物的二聚体，在克隆前需要做凝胶纯化。
　　6、如果实验中没有回收到目的片段，则需要继续进行对照实验。包括涂布未转化的感受态细胞、转化完整质粒，计算菌落生长数，测定转化效率、用标准载体，连接对照，转化高频率感受态细胞，按照的实验步骤进行。
　　7、实验中出现假阳性扩增该怎么办？这是扩增系统受到污染的表现，应通过检查排除污染源。先考虑是否为试剂污染，可将试剂分装好直接置于PCR仪中扩增进行判断。
　　8、其次要考虑是否为实验室污染，可更换所用的移液器、吸咀管（离心管）等，将试验中的关键步骤转移到一个新的环境中，判断是否为实验室污染。
　　9、如果是则需要对整个实验室及实验器材*清洗处理，保持良好的通风、清洁等。此外，还要考虑是否为采样污染，一般表现为一批结果阳性率很高，一批结果阳性率又下降很多，如此反复。解决方法为尽量使用一次试管及吸咀取样。
　　总结：ABI7500荧光定量PCR仪的使用注意事项小编就分享到这了，看完本文您就应该有了基本的认识和了解相信大家都明白了吧！总的来说，希望对大家有所帮助。

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